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对多功能酶标仪的吸附试验原理进行分析

点击:293 时间:2023-07-07

多功能酶标仪在医疗应用领域具有广泛的使用。下面将对其吸附试验的基本原理进行解释:
(一)先将过量的特异抗体(或抗原)覆盖在载体(酶标板)上,然后利用抗原抗体反应使待检测物质(抗原或抗体)与酶标记结合在载体上。在除去游离的酶标记物后,加入底物,已经结合在载体上的标记酶引起底物显色。然后,可以利用光电比色法对待测物进行定性或定量分析。该方法的检测灵敏度可以达到ng/ml水平。
(二)准备酶标板:将特异抗原溶液加入酶标板的孔中,在4℃下静置一晚。然后使用洗涤液洗涤3至5次(使用洗板机进行洗板),这样特异抗原会被牢固吸附在酶标板微孔表面上,形成固定的抗原。同时,残留液和杂质会被清洗掉。
(三)加入被测样本液(病人血清):如果样本液中含有待测抗体,经过加温反应后,待测抗体会与已经被包被的抗原发生特定的结合反应,形成包被抗原与待测抗体的复合物,这些复合物会被吸附在酶标板微孔表面。然后进行再次洗涤,以去除残留物和干扰物质。
(四)酶结合复合物:经过温育反应后,生成包含抗原、待测抗体和酶标记抗原的复合物。这个复合物会被吸附在微孔表面上,在完成这一步后,需要再次进行洗涤,以去除游离的或非特异性沾附的酶结合物(洗板)。
(五)加入显色液:在经过10分钟到20分钟的显色反应后,被吸附复合物中的酶与显色底物液生成有色溶液。此时,由于游离或非特异吸附的酶已经被去除,所以溶液颜色的深浅仅由已与待测物结合的酶的数量决定,因此能准确反映待测物的浓度。如果固化的酶越多,显色就会越深,这就表示待测物的浓度越高。
第六步:添加终止液以终止显色反应。
使用多功能酶标仪进行检测:将已显色的酶标板放置在酶标仪器上进行光电比色检测。该仪器能够分别检测空白孔、阴阳性对照孔、标准孔、质控孔以及患者样本孔的吸光度值,并根据设定的程序要求自动计算出患者样本中待测物的浓度或进行定性分析。