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如何评估多功能酶标仪的性能?

点击:90 时间:2024-03-15


近年来,多功能酶标仪在临床实验室中的应用越来越广泛,提升了酶免疫分析法(EIA)的自动化程度和性。特别是近几年,国内外单通道和多通道全自动酶标仪的种类和型号发展迅速,成为临床实验室自动化程度的又一次提升。然而,目前对酶标仪性能系统评价的方法较为缺乏,评价指标有的过于简单,有的方法不够一致,导致不同仪器、厂家和用户之间的评价指标缺乏可比性。这主要是因为多功能酶标仪与其他水平光路光度测定仪器在制造工艺(如多通道检测器)、测定原理(如垂直光路光度测定法)方面存在较大差异。因此,为了满足广大读者和用户的需求,有必要对酶标仪的性能评价和鉴定方法的理论和原理进行介绍和补充,以供同行在评估、鉴定和使用仪器时参考,从而确保进一步提升室内重复性和室间可比性,提供可靠保证。
一.滤光片波长准确性检测及吸收波长测定
方法以及其评估标准:使用高精度紫外可见分光光度计(波长精度±0.3nm)对不同波长的滤光片进行光谱扫描,通过比较检测数值和标定数值的差异来确定滤光片的波长精度。差值越接近于零且波峰越显著,则代表滤光片的质量越高,波长精度越高。
二.监测灵敏度和准确性
操作步骤:①敏感度测试:制备6微克/毫升重铬酸钾(干燥)溶液(0.05摩尔/升硫酸溶解),向小量容器中加入200微升重铬酸钾溶液,使用0.05摩尔/升硫酸溶液作为空白试剂,在450纳米(比较波长为650纳米)测定吸光度,其数值应不低于0.01。②准确性检测:制备1毫摩尔/升对硝基苯酚(提纯品)水溶液,然后以10毫摩尔/升氢氧化钠溶液稀释25倍,向小量容器中加入200微升稀释液,以10毫摩尔/升氢氧化钠溶液作为空白试剂,在405纳米(比较波长为650纳米)检测吸光度,其值应在0.4左右(0.395~0.408)。
三.检测通道不平坦与通孔间差异
方法和表达形式:
1. 通路差异检测:挑选一个酶标板小孔板(杯底需光滑、透明、无划痕、无污染)放在酶标板架上,分别加入三种不同浓度的甲基橙溶液200微升后放置在8个通道相应位置,以蒸馏水调零,使用双波长(测定波长490纳米,参比波长630或650纳米,以下皆同)连续测量三次,观察不同通道之间测定结果的一致性,通过极差值来表示通道之间的差异。
2. 孔间差的测量:选用同一厂家、同一批次的酶标板条(共8条96孔),分别加入200微升甲基橙溶液(吸光度调整到0.065~0.070A),放入同一通道后,以蒸馏水调零,采用双波长检测,其误差大小用±1.96s来衡量。
零点飘移
步骤:准备八只小孔杯,放置在八个通道上,每个加入200ul蒸馏水并调零。选择双波长或单波长(490nm)每30分钟测定一次,观察8个通道内4小时内的吸光度变化。与初始值相比的差值即为零点漂移。
精密度评价
实验步骤和评估指标:每个管道放三个小杯子,分别注入200微升高、中、低三种浓度的甲基橙溶液,用蒸馏水调零,采用双波长进行双重平行测定,每天测定两次,持续20天。计算批内精密度、日内批间精密度、日间精密度和总精密度,以及相应的变异系数值。